bmgrp BI-20022說(shuō)明書(shū) 

MDA-oxLDL ELISA | BI-20022

MDA-oxLDL ELISA | BI-20022

MDA oxLDL ELISA試劑盒亮點(diǎn)：

• 對(duì)MDA加合物的高度特異性
• 小樣品量– 20 µl /孔
• 直接測(cè)量

• 1個(gè)

分析特征

• 方法

  夾心ELISA，HRP / TMB，12×8孔可分離試紙

• 樣品類(lèi)型

  血清，EDTA血漿，肝素血漿，檸檬酸鹽血漿

• 樣品量

  20 µl /孔

• 測(cè)定時(shí)間

  90分鐘/ 90分鐘/ 30分鐘

• 靈敏度

  0.05微克/毫升

• 標(biāo)準(zhǔn)范圍

  0 – 10 µg / ml

• 特異性

  人MDA-oxLDL加合物

• 中間運(yùn)行（n = 4）：≤7％CV

  批量分析（n = 3）：≤8％CV

• 采用

  僅供研究使用。

MDA oxLDL ELISA產(chǎn)品概述

MDA oxLDL ELISA試劑盒是一種4小時(shí)，96孔夾心ELISA，用于定量測(cè)定人血清和血漿（EDTA，肝素，檸檬酸鹽）樣品中的MDA-oxLDL加合物。oxldl分析采用基于人血清的標(biāo)準(zhǔn)品，以確保對(duì)生物學(xué)上可靠的數(shù)據(jù)進(jìn)行測(cè)量。

MDA oxLDL ELISA測(cè)定原理

MDA-oxLDL ELISA試劑盒是一種夾心酶免疫測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清和血漿（EDTA，肝素，檸檬酸鹽）樣品中的人MDA-oxLDL加合物。

下圖說(shuō)明了MDA-oxLDL夾心ELISA的原理：

捕獲抗體： 小鼠抗人MDA-oxLDL 單克隆抗體
檢測(cè)抗體：小鼠抗人MDA-oxLDL單克隆抗體，HRP標(biāo)記
靶抗原： MDA-oxLDL

一步，將測(cè)定緩沖液和標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品移液到微量滴定條的孔中，這些孔預(yù)先用單克隆小鼠抗人MDA-oxLDL抗體包被。存在于標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品中的MDA-oxLDL被孔中的預(yù)包被抗體捕獲。在洗滌步驟中，去除所有非特異性未結(jié)合的材料。在第二步中，將綴合物（單克隆小鼠抗人MDA-oxLDL-HRP）吸取到孔中，并形成與MDA-oxLDL夾在板上的夾心抗體的三明治。在另一個(gè)洗滌步驟之后，將底物（TMB，四甲基聯(lián)苯胺）吸移到孔中。底物的酶催化顏色變化與MDA-oxLDL的量成正比。使用標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板讀數(shù)器可以檢測(cè)到這種顏色變化。使用從標(biāo)準(zhǔn)品獲得的值，生成吸光度（光密度，在450 nm處的OD）與標(biāo)準(zhǔn)濃度的劑量響應(yīng)曲線(xiàn)。直接從劑量響應(yīng)曲線(xiàn)確定樣品中MDA-oxLDL的濃度。

MDA oxLDL ELISA典型標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

下圖顯示了人oxldl ELISA試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

MDA oxLDL ELISA試劑盒組件

儲(chǔ)存說(shuō)明： MDA-oxLDL ELISA試劑盒中的所有試劑在4°C穩(wěn)定，直到每種試劑標(biāo)簽上注明的有效期。

使用說(shuō)明

• 樣品收集與儲(chǔ)存
• 試劑準(zhǔn)備
• 樣品制備

• 檢測(cè)方案
• 計(jì)算結(jié)果

樣品收集與儲(chǔ)存

血清，EDTA血漿，肝素血漿，檸檬酸鹽血漿適用于該oxldl ELISA試劑盒。研究期間請(qǐng)勿更改樣品類(lèi)型。我們建議對(duì)所有樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件旨在作為一般準(zhǔn)則。

血清和血漿

 使用EDTA，肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑，在標(biāo)準(zhǔn)化血清分離管（SST）或標(biāo)準(zhǔn)化血液采集管中收集靜脈血樣。對(duì)于血清樣品，讓樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘。根據(jù)試管制造商的使用說(shuō)明離心分離。立即測(cè)定采集的樣品，或等分試樣并保存在-25°C或更低的溫度下。脂血或溶血的樣品可能會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。樣品可以經(jīng)歷至少四個(gè)凍融循環(huán)。

試劑準(zhǔn)備

洗滌緩沖液

稀釋的WASHBUF在4°C（2-8°C）下可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。

血清和血漿測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)和控制

重構(gòu)的STD和CTRL在-25°C或更低的溫度下穩(wěn)定，直到標(biāo)簽上標(biāo)明的失效日期為止。STD和CTRL在四個(gè)凍融循環(huán)中保持穩(wěn)定。

樣品制備

將樣品置于室溫并輕輕混合樣品，以確保樣品均勻。我們建議對(duì)所有樣品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。

OD值超出標(biāo)準(zhǔn)范圍的高點(diǎn)的樣品可以稀釋STD1（標(biāo)準(zhǔn)品1）或oxLDL陰性人類(lèi)血清。建議稀釋度高為1:10。

MDA oxLDL檢測(cè)方案

在開(kāi)始測(cè)定之前，請(qǐng)閱讀整個(gè)方案。

計(jì)算結(jié)果

使用450 nm波長(zhǎng)（參考波長(zhǎng)630 nm）在讀板器上讀取所有孔的光密度（OD）。使用能夠生成四參數(shù)對(duì)數(shù)（4-PL）擬合的市售軟件從標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度讀數(shù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。或者，將標(biāo)樣在x軸上的濃度相對(duì)于每種標(biāo)樣在y軸上的平均吸光度作圖，并通過(guò)圖中的點(diǎn)繪制擬合曲線(xiàn)。除4-PL以外的曲線(xiàn)擬合算法尚未得到驗(yàn)證，用戶(hù)需要對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。

計(jì)算樣品的終濃度時(shí)，必須考慮各自的稀釋系數(shù)。

套件隨附的質(zhì)量控制（QC）協(xié)議顯示了生產(chǎn)日期每個(gè)批次終版本QC的結(jié)果?？蛻?hù)獲得的OD數(shù)據(jù)可能會(huì)因各種影響和/或由于保質(zhì)期內(nèi)信號(hào)強(qiáng)度的正常下降而有所不同。但是，只要濃度高的STD的OD為1.0或更高且CTRL的值在范圍內(nèi)（目標(biāo)范圍，請(qǐng)參見(jiàn)標(biāo)簽），這就不會(huì)影響結(jié)果的有效性。

背景與治療領(lǐng)域

氧化的低密度脂蛋白（oxLDLs）在動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈疾病的進(jìn)展中起重要作用。低密度脂蛋白（LDL）是血漿膽固醇的主要載體，由疏水性核心以及極性脂質(zhì)和載脂蛋白B（ApoB）的表面單層組成。氧化應(yīng)激和隨后形成的自由基導(dǎo)致ApoB的過(guò)氧化。丙二醛（MDA）已被確定為L(zhǎng)DL的主要脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物之一，因此在LDL氧化中起著重要作用。
Biomedica MDA oxLDL ELISA特異性檢測(cè)人血清和血漿中MDA修飾的ApoB。

• 心血管疾病

  • 動(dòng)脈粥樣硬化