IBA-lifesciences

德國(guó)IBA GmbH致力于向生命科學(xué)研究提供高質(zhì)量的工具。作為一個(gè) "TAGnology" 公司，IBA是一個(gè)合格的學(xué)術(shù)界研究伙伴，是表達(dá)克隆和蛋白質(zhì)純化技術(shù)以及蛋白質(zhì)和核酸遞送技術(shù)的zui前沿的供應(yīng)商之一，其的蛋白質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)覆蓋整個(gè)藥物發(fā)現(xiàn)過(guò)程。IBAGmbH總部座落于德國(guó)的哥廷根，它從2000年開(kāi)始在世界范圍的市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)其產(chǎn)品和服務(wù)。Strep-tag是一個(gè)通用的技術(shù)平臺(tái)，用于克隆、表達(dá)、一步純化、檢測(cè)和分析純的、具有生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。在雙標(biāo)簽蛋白質(zhì)中，作為Strep-tag的*伙伴，IBA還提供6 xHistidine-tag 用以對(duì)全長(zhǎng)表達(dá)進(jìn)行快速控制，并且由于采用這兩種獨(dú)立的純化方法而增加蛋白質(zhì)純度。新技術(shù)MATra ("Magnet Assisted Transfection") 可以有效轉(zhuǎn)染大范圍的細(xì)胞系。MALipofection Enhancer與新的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑IBAfect的組合是一個(gè)的“磁力輔助的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染”組合。Streptamer技術(shù)是功能性T細(xì)胞分離的一個(gè)突破，它是一種對(duì)抗原特異T細(xì)胞進(jìn)行功能性分離和鑒定的新方法。IBA開(kāi)發(fā)的Twin-Strep-Tag系統(tǒng)用于離析多蛋白質(zhì)復(fù)合體以及鑒定蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。2007年底，IBA隆重推出了組合式克隆的新產(chǎn)品StarGate，用以系統(tǒng)地將任何目的基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌、酵母、哺乳動(dòng)物等背景細(xì)胞，高速和方便地篩選優(yōu)化的宿主/標(biāo)簽組合。

Strep-tag® / Strep-Tactin®蛋白質(zhì)表達(dá)與純化系統(tǒng) 　　作為后基因組時(shí)代表達(dá)克隆和蛋白質(zhì)純化技術(shù)zui重要的供應(yīng)商之一，德國(guó)IBA公司開(kāi)發(fā)了一個(gè)稱為Strep-tag的通用技術(shù)平臺(tái)。這種快速、合算、多樣性地生產(chǎn)和使用重組蛋白的技術(shù)平臺(tái)是IBA與TU Munich的Arne Skerra博士教授密切合作開(kāi)發(fā)而成。除了圍繞Strep-tag的大型產(chǎn)品組合外，IBA還*提供應(yīng)用該技術(shù)的蛋白質(zhì)生產(chǎn)定制服務(wù)。 　　Strep-tag技術(shù)開(kāi)發(fā)的原理是*的生物素（biotin）和抗生物素蛋白鏈菌素（streptavidin）之間的結(jié)合反應(yīng)。為了將這種牢固的相互作用用于蛋白質(zhì)純化用途，研究者們發(fā)現(xiàn)需要一個(gè)肽，該肽與重組蛋白質(zhì)融合后，能夠結(jié)合在streptavidin的生物素結(jié)合口袋，從而作為純化tag。zui后研究者們成功設(shè)計(jì)出一個(gè)只由8個(gè)氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)構(gòu)成的短序列并稱之為Strep-tag II。為了優(yōu)化結(jié)合屬性，streptavidin也被設(shè)計(jì)成為Strep-Tactin。如此，一對(duì)優(yōu)化的結(jié)合伙伴被發(fā)現(xiàn)了：Strep-tag / Strep-Tactin系統(tǒng)現(xiàn)已成為zui被廣泛應(yīng)用的親和層析系統(tǒng)之一。 　　Strep-Tactin與多種不同的基質(zhì)偶聯(lián)，使Strep-tag融合蛋白得以在生理?xiàng)l件下親和純化。與其他tag相比，這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性，并僅經(jīng)一步層析后即可產(chǎn)出超過(guò)99%的純度。

 Strep-Tactin: Engineered streptavidin for optimal binding of a short peptide called “Strep-tag”

 　　Strep-tag®系統(tǒng)可用于從任何表達(dá)系統(tǒng)包括桿狀病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌中純化Strep-tag II蛋白。用于細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和酵母的表達(dá)載體請(qǐng)參見(jiàn)本欄目相關(guān)章節(jié)。 　　除了表達(dá)載體，IBA還提供圍繞Strep-tag用于蛋白質(zhì)純化、檢測(cè)、分析（蛋白質(zhì)固定）、蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用研究以及高通量純化的完整的產(chǎn)品組合。

The tag技術(shù)蛋白質(zhì)僅8個(gè)氨基酸平衡的氨基酸組成 – 對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和活性一般沒(méi)有影響高選擇性和易于控制的結(jié)合屬性 C-或N-末端融合無(wú)需去除有效和通用的表達(dá)載體，標(biāo)準(zhǔn)化的克隆策略生理?xiàng)l件下的親和層析通過(guò)顏色改變可見(jiàn)柱再生和活性狀態(tài)（見(jiàn)下）可獲得超過(guò)99%的純度Strep-tag適用于：金屬蛋白膜蛋白具有多個(gè)亞單位的敏感蛋白質(zhì)復(fù)合體以及其他任何蛋白質(zhì)

結(jié)合： GFP Strep-tag 蛋白結(jié)合于Strep-Tactin洗脫： 用脫硫生物素再生（顏色控制）： 開(kāi)始去除脫硫生物素再生： 脫硫生物素被*除去再生： 用平衡緩沖液快速再生

純化在E. coli 中過(guò)度表達(dá)的GFP-Strep-tag II 融合蛋白 圖片(從左至右)：1、GFP-Strep-tag II融合蛋白特異結(jié)合在Strep-Tactin SepharoseÒ柱上，而非特異性蛋白質(zhì)被少量生理性洗滌緩沖液迅速洗去。2、由于加入特異性競(jìng)爭(zhēng)劑脫硫生物素，Strep-tag蛋白被洗脫。3-5、柱再生：脫硫生物素被黃色溶液HABA取代，后者一旦與Strep-Tactin復(fù)合即變?yōu)榧t色。HABA隨后被洗滌緩沖液除去，柱子可被重新使用。 怎樣獲得優(yōu)良無(wú)比的純化因素 　　Strep-tag® 純化系統(tǒng)是基于Strep-tag II肽和特殊設(shè)計(jì)的Strep-Tactin（streptavidin的變體）之間高選擇性和極易控制的相互作用而建立起來(lái)的蛋白純化系統(tǒng)。Strep-tag II對(duì)Strep-Tactin的結(jié)合親和力比對(duì)streptavidin高將近100倍。在親和純化過(guò)程中，附了tag的蛋白質(zhì)結(jié)合在被固定了的Strep-Tactin上。生理緩沖液如PBS可與一系列添加劑一起用于該純化過(guò)程。短暫的洗滌步驟之后，在同一緩沖液中加入脫硫生物素（2.5 mM）即可將純化的重組蛋白溫和地洗脫下來(lái)。脫硫生物素是一種便宜的、可逆結(jié)合的、穩(wěn)定的生物素類(lèi)似物，而生物素是streptavidin的天然配體。這種競(jìng)爭(zhēng)性洗脫是賦予特異性的第二步，從而得到優(yōu)良無(wú)比的純化因素。該系統(tǒng)安全、易于使用；純化柱再生和活性狀態(tài)可以通過(guò)純化柱上的顏色改變來(lái)觀察到。 　　Strep-tag融合蛋白可以經(jīng)Western blots, ELISA, 電子或熒光顯微鏡進(jìn)行方便的檢測(cè)。有相應(yīng)的Strep-Tactin酶共軛物和抗Strep-tag II的單克隆抗體供出售。 Strep-tag®II對(duì)蛋白質(zhì)的影響可以忽略 　　此8個(gè)氨基酸的短肽tag由于具有化學(xué)平衡的氨基酸組成（WSHPQFEK），因此對(duì)重組蛋白的影響可以忽略不計(jì)。該tag可以被置于C-端或N-端。建議在蛋白和tag之間加入2個(gè)氨基酸的間隔以確保tag的可接近性?？偟膩?lái)說(shuō)，該tag不干擾蛋白質(zhì)的折疊或生物活性、不與重金屬離子緩沖液雜質(zhì)反應(yīng)、無(wú)離子交換屬性、不會(huì)誘導(dǎo)蛋白質(zhì)聚集。因此無(wú)需去除該tag。 Strep-Tactin®：長(zhǎng)效的親和柱 　　Strep-Tactin是streptavidin的一種衍生物，是已知zui穩(wěn)定的蛋白質(zhì)之一。Streptavidin對(duì)以8 M urea或guanidine, 0.5 M NaOH以及50 % formamide (t = 1 h; T = 37 °C)的處理保持穩(wěn)定。蛋白酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶和彈性蛋白酶等) 在1:50 w/w比例下，37 °C孵育2小時(shí)都無(wú)法切割 streptavidin。當(dāng)SDS存在時(shí)，僅在溫度高于60 °C時(shí)，streptavidin才開(kāi)始降解成單體。經(jīng)過(guò)測(cè)試，Strep-Tactin已經(jīng)被證實(shí)具有上述作為長(zhǎng)效親和柱*的特性，可被重復(fù)使用3-5次。而且，Strep-Tactin的中性PI值使非特異性蛋白質(zhì)或核酸的結(jié)合降到zui低。 Strep-Tactin樹(shù)脂技術(shù)指標(biāo) 　　有5種版本Strep-Tactin樹(shù)脂，區(qū)別在于其特性和應(yīng)用。Strep-TactinSepharose®優(yōu)先用于重力流層析；Strep-TactinSuperflow®和Strep-TactinMacroPrep®也可用于低壓力或FPLC；Strep-TactinPOROS®(20和50)用于FPLC和HPLC層析。每個(gè)基質(zhì)都會(huì)表現(xiàn)出不同的非特異性結(jié)合性質(zhì)，當(dāng)使用某種基質(zhì)由于非特異性背景而無(wú)法獲得滿意結(jié)果時(shí)，建議換用其它的基質(zhì)（亦請(qǐng)見(jiàn)Strep-TactinColumnEvaluationSets）。此外Superflow尤其適用于增加的流速，也適用于大的蛋白質(zhì)復(fù)合物的純化。 
　　請(qǐng)注意，Strep-Tactin樹(shù)脂被優(yōu)化用于柱親和層析，而不適用于批量純化。批量純化請(qǐng)使用IBA的MagStrepStrep-Tactin包被的磁珠。 
表1:與Strep-tag/Strep-Tactin相互作用兼容的試劑

試劑濃度Reduction AgentsDTT50 mMβ-mercaptoethanol50 mMNon-Ionic DetergentsC8E4 Octyltetraoxyethylenezui高0.88 %C10E5; Decylpentaoxyethylene0.12 %C10 E60.03 %C12 E80.005 %C12E9; Dodecyl nonaoxyethylene (Thesit)0.023 %DM; Decyl-β-D-maltoside0.35 %LM; N-dodecyl β-D-maltoside0.007 %NG; N-nonyl-β-D-glucopyranoside0.2 %OG; N-octyl-β-D-glucopyranoside2.34 %TX; Triton X-1002 %Tween 202 %Ionic DetergentsN-lauryl-sarcosine2 %8-HESO;N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide1,32 %SDS; Sodium-N-dodecyl sulfate0.1 %Zwitter-Ionic DetergentsCHAPS0.1 %DDAO; N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.034 %LDAO; N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.13 %其它Ammonium sulfate (NH4)2SO42 MCaCl2zui高1 MEtha0%EDTA50 mMGuanidinezui高1 MGlycerolzui高25 %Imidazolezui高250 mMMgCl21 MNaCl5 MUreazui高1 M

注意：這些試劑在高達(dá)上述濃度下已成功用于純化如GAPDH-Strep-tagÒ。未標(biāo)注“zui高”的試劑，也許可以使用更高濃度。由于結(jié)合依賴于Strep-tag在特殊蛋白質(zhì)中的空間可及性，所給的濃度值對(duì)于其他蛋白質(zhì)可能有偏差。 Strep-Tactin®Sepharose® 　　Strep-Tactin Sepharose提供高結(jié)合容量和zui低的非特異結(jié)合（見(jiàn)下圖），可用于重力流純化。由于Strep-Tactin樹(shù)脂經(jīng)過(guò)優(yōu)化適于柱親和層析，而不適于批量純化，因此推薦使用預(yù)裝的Strep-Tactin Sepharose柱。該純化柱有多種形式，從0.2 ml迷你柱到10 ml柱。

Strep-Tactin Sepharose樹(shù)脂技術(shù)指標(biāo)：

Strep-Tactin濃度：5 mg/ml 沉積樹(shù)脂結(jié)合容量：1 ml沉積樹(shù)脂可一步法純化50-100 nmol 重組蛋白(多達(dá)3 mg 30 KDa蛋白質(zhì))支持介質(zhì)：Sepharose 4FF, 4 % agarose珠子大小45 - 165 µm線性流動(dòng)速率：重力流排阻極限：3 x 107 Da形式：50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl穩(wěn)定性：室溫運(yùn)輸后能保存至少6個(gè)月保存：4 °C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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目錄號(hào)產(chǎn)品說(shuō)明規(guī)格供應(yīng)商2-1202-550重力流Strep-Tactin Sepharose迷你柱（0.2 ml柱床體積）5 柱IBA2-1202-001重力流Strep-Tactin Sepharose柱（1 ml柱床體積）1 柱IBA2-1202-0505 柱IBA2-1202-051重力流Strep-Tactin Sepharose柱（5 ml柱床體積）1 柱IBA2-1202-101重力流Strep-Tactin Sepharose柱（10 ml柱床體積）1 柱IBA2-1201-002Strep-Tactin Sepharose (50 %懸浮)4 mlIBA2-1201-01020 mlIBA2-1201-02550 mlIBA2-1201-100200 mlIBA2-1201-5001000 mlIBA

  Strep-Tactin® Superflow® 　　Strep-TactinSuperflow具有*的機(jī)械穩(wěn)定性、的流動(dòng)特性以及高動(dòng)態(tài)結(jié)合容量，可以用于重力流和FPLC，適用于增加的流動(dòng)速率及純化大的蛋白復(fù)合物（見(jiàn)下圖特殊用途）。 
　　由于Strep-Tactin樹(shù)脂經(jīng)過(guò)優(yōu)化適合柱親和純化而不適于批量純化，因此推薦使用預(yù)填裝的Strep-TactinSuperflow柱。柱具有多種規(guī)格（從0.2ml迷你柱至10ml柱），是為重力流而設(shè)計(jì)。若為更方便的用途如FPLC所用，Strep-TactinSuperflow尚有預(yù)填裝的cartridges。 Strep-Tactin Superflow樹(shù)脂技術(shù)指標(biāo)：

結(jié)合容量：1 ml沉積樹(shù)脂（對(duì)應(yīng)于2 ml 50 % 懸浮液）可用以一步純化50-100 nmol重組蛋白（高達(dá)3 mg 30 kDa蛋白質(zhì)）支持介質(zhì)：Superflow 6 (6 % agarose，交聯(lián))珠子大小：60-160 µm，球形線性流動(dòng)速率：推薦100-300 cm/h用于純化Strep-tag蛋白形式(bulk)50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA穩(wěn)定性：室溫運(yùn)輸后可以保存6個(gè)月保存：4°C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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目錄號(hào)產(chǎn)品說(shuō)明規(guī)格供應(yīng)商2-1207-550重力流Strep-Tactin Superflow迷你柱（0.2 ml柱床體積）5 柱IBA2-1207-001重力流Strep-Tactin Superflow柱（1 ml柱床體積）1柱IBA2-1207-0505 柱IBA2-1207-051重力流Strep-Tactin Superflow柱（5 ml柱床體積）1柱IBA2-1207-101重力流Strep-Tactin Superflow柱（10 ml柱床體積）1柱IBA2-1211-001Strep-Tactin Superflow cartridge（1 ml柱床體積）1 cartridgeIBA2-1211-050Strep-Tactin Superflow cartridge（1 ml柱床體積）5 cartridgesIBA2-1212-001Strep-Tactin Superflow cartridge（5 ml柱床體積）1 cartridgeIBA2-1212-050Strep-Tactin Superflow cartridge（5 ml柱床體積）5 cartridgesIBA2-1206-002Strep-Tactin Superflow (50 % suspension)4 mlIBA2-1206-01020 mlIBA2-1206-02550 mlIBA2-1206-100200 mlIBA2-1206-5001000 mlIBA

 Strep-Tactin® MacroPrep® 　　Strep-Tactin MacroPrep適合所有低壓力層析應(yīng)用。MacroPrep樹(shù)脂展現(xiàn)與Sepharose®或Superflow®不同的非特異結(jié)合性質(zhì)，因此當(dāng)采用Sepharose®或Superflow®無(wú)法獲得優(yōu)化結(jié)果時(shí)，推薦使用MacroPrep樹(shù)脂，反之亦然（見(jiàn)下圖）。由于Strep-tag純化系統(tǒng)是為柱親和層析而非批量純化而設(shè)計(jì)，因此推薦使用我們預(yù)裝的Strep-Tactin MacroPrep裝置用于柱層析。　　重力流柱具有多種規(guī)格，柱床體積分別為0.2 ml、1 ml、5 ml和10 ml，使用時(shí)無(wú)需任何進(jìn)一步的特殊設(shè)備。Strep-Tactin MacroPrepcartridges是預(yù)填裝的即用型層析柱，可以方便地與注射器、蠕動(dòng)泵層析系統(tǒng)或FPLC / HPLC工作站一起使用，以在低壓力條件下快速、全自動(dòng)的純化Strep-tag融合蛋白。 　　Strep-Tactin MacroPrep cartridges有1 ml和5 ml并且可以串聯(lián)以擴(kuò)大吸附容量。IBA也供應(yīng)螺紋入口和出口的接頭。1 ml Strep-Tactin MacroPrepcartridges的平均吸附容量是每次50-100 nmol重組Strep-tag融合蛋白，推薦的流動(dòng)速率為1 ml / minute (大約相當(dāng)于使用注射器時(shí)每分鐘20滴)。 Strep-Tactin MacroPrep樹(shù)脂技術(shù)指標(biāo)：

結(jié)合容量：1 ml沉積樹(shù)脂(相當(dāng)于2 ml 50 % 的懸浮液) 可用于一步純化50-100 nmol重組蛋白支持介質(zhì)：MacroPrep® 50 (polymethacrylate)珠子大小：50 µm線性流動(dòng)速率：高達(dá)300 cm/h可用于Strep-tag純化形式(bulk)：50 % suspension in 100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1mM EDTA, 150 mM NaCl穩(wěn)定性：運(yùn)輸后可以保存6個(gè)月保存：4 °C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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 Strep-Tactin® POROS®  　　Strep-Tactin POROS優(yōu)化組合了高流動(dòng)速率、高選擇性結(jié)合和高動(dòng)態(tài)容量（見(jiàn)下圖），可用于FPLC或HPLC以快速純化Strep-tag蛋白。Strep-Tactin POROS 20的珠子大小為20 µm，而POROS 50的珠子大小為50 µm，但其結(jié)合容量相同。由于Strep-Tactin樹(shù)脂經(jīng)過(guò)優(yōu)化適合柱親和純化，而不適于批量純化，因此推薦使用預(yù)裝的1.7 ml的Strep-Tactin POROS柱用于FPLC和HPLC。請(qǐng)注意：POROS 的結(jié)合容量只有Strep-Tactin Sepharose、Superflow和MacroPrep的一半左右；POROS不被推薦用于膜蛋白純化。  Strep-Tactin POROS樹(shù)脂技術(shù)指標(biāo)：

結(jié)合容量：1.7 ml柱可用于一步法純化40-80 nmol重組蛋白支持介質(zhì)：POROS 20或POROS 50珠子大小20 µm或50 µm線性流動(dòng)速率：300 - 500 cm/h可用于 Strep-tag純化形式 (bulk)50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1mM EDTA, 150 mM NaCl穩(wěn)定性：運(yùn)輸后至少6個(gè)月保存：4 °C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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目錄號(hào)產(chǎn)品說(shuō)明規(guī)格供應(yīng)商2-1203-017即用型Strep-Tactin POROS 20柱（1.7 ml柱床體積）1 柱IBA2-1205-017即用型Strep-Tactin POROS 50柱（1.7 ml柱床體積）1 柱IBA2-1203-001Strep-Tactin POROS 20 (50 %懸浮)2 mlIBA2-1203-0024 mlIBA2-1203-00510 mlIBA2-1203-01020 mlIBA2-1205-001Strep-Tactin POROS 50 (50%懸浮)2 mlIBA2-1205-0024 mlIBA2-1205-00510 mlIBA2-1205-01020 mlIBA

Strep-Tactinâ 離心柱（Spin Columns）——用于快速平行純化Strep-tagâ蛋白 l 10分鐘之內(nèi)純化多達(dá)150 ug Strep-tag蛋白 l 即用型離心柱 l 快速平行處理多個(gè)樣本 l 非常合算 　　為了快速、易于操作的蛋白質(zhì)平行純化，IBA提供多用途的Strep-Tactin 離心柱以填補(bǔ)Strep-Tactin重力流柱與以96孔形式高通量純化的Strep-Well HT純化微孔板之間的空缺。 Strep-Tactin 離心柱技術(shù)指標(biāo)

產(chǎn)品說(shuō)明：即用型帶有固定好的Strep-Tactin的離心柱，用于從小規(guī)模表達(dá)培養(yǎng)物中快速純化Strep-tag蛋白形式（柱）：50個(gè)預(yù)填裝離心柱和接收管。用前需以Buffer W (100 mM Tris / HCl pH8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl) 將離心柱重新水化和激活。結(jié)合容量：多達(dá)150 ug Strep-tag II融合蛋白穩(wěn)定性：運(yùn)輸后6個(gè)月貯存：4°C運(yùn)輸：室溫

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目錄號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格供應(yīng)商2-1800-000Strep-Tactin Spin Column kit1 kitIBA2-1850-050Strep-Tactin Spin Columns50 columnsIBA

Strep-Tactin Spin Column kit包含50個(gè)spin柱，收集管，洗滌緩沖液，洗脫緩沖液和對(duì)照質(zhì)粒。 表達(dá)載體 Tet和T7表達(dá)系統(tǒng) Tet表達(dá)系統(tǒng) 特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：

以pASK-IBA載體在大腸桿菌中高水平表達(dá) 由于tet啟動(dòng)子而使表達(dá)受到緊密調(diào)控 增加細(xì)胞毒性基因的穩(wěn)定性 通用的克隆策略，只需一個(gè)限制性內(nèi)切酶 N-端或C-端Strep-tag II融合 N-端或C-端6xHistidine-tag融合 Strep-tag II/6xHistidine-tag雙標(biāo)記載體 胞液或外周胞質(zhì)中表達(dá) 無(wú)水四環(huán)素（anhydrotetracycline，AHT）誘導(dǎo)表達(dá) 氨卞青霉素或氯霉素抗性

 原理和特性：　　pASK-IBA載體與受緊密調(diào)控的tet啟動(dòng)子一起工作。tet抑制子在pASK-IBA質(zhì)粒上編碼，并分別從beta-內(nèi)酰胺酶啟動(dòng)子或氯霉素乙酰基轉(zhuǎn)移酶啟動(dòng)子組成型表達(dá)。這種特殊的安排保證了抑制分子和質(zhì)粒拷貝數(shù)之間平衡的化學(xué)計(jì)量。在低濃度無(wú)水四環(huán)素的有效化學(xué)誘導(dǎo)下，外源基因表達(dá)受到的嚴(yán)格抑制才得以解除。與lac啟動(dòng)子（有漏洞、易受分解代謝產(chǎn)物（cAMP水平，代謝狀態(tài)）的抑制以及受染色體編碼的抑制分子的影響）相比，tetA啟動(dòng)子/操縱子受到緊密調(diào)控，不與任何細(xì)胞調(diào)節(jié)機(jī)制或遺傳背景有功能上的偶聯(lián)?！　∫虼耍瑹o(wú)需特殊大腸桿菌菌株或額外質(zhì)粒，多種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下都可以應(yīng)用。例如，葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基甚至XL 1-Blue菌株（攜帶四環(huán)素抗性基因的一個(gè)附加拷貝），也可用于表達(dá)。pASK-IBA表達(dá)系統(tǒng)在發(fā)酵等多種條件下非常穩(wěn)定，操作方便?！　〖?xì)胞質(zhì)pASK-IBA載體現(xiàn)以“plus”版本提供。這種新版本包含改良的翻譯起始位點(diǎn)以增加一級(jí)蛋白質(zhì)產(chǎn)量，而“plus”載體（如pASK-IBA3plus）的其余序列與其“非plus”前體（如pASK-IBA3）相同。“非plus”版載體從現(xiàn)在開(kāi)始僅按需供應(yīng)?！　≥d體的更多元件包括一個(gè)前后串聯(lián)的核糖體結(jié)合位點(diǎn)（RBS），保證翻譯的有效起始；脂蛋白基因的強(qiáng)終止子，以避免通讀；噬菌體f1的基因間區(qū)域，以提供一種制備單鏈DNA的方法；以及一個(gè)beta-內(nèi)酰胺酶或氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶基因*。這些載體均不介導(dǎo)抗四環(huán)素抗性。 *使用帶beta-內(nèi)酰胺酶抗性基因的克隆載體可能會(huì)有某些局限性，因?yàn)榘逼S青霉素在細(xì)菌培養(yǎng)基里降解的相當(dāng)快。因此，我們現(xiàn)在以氯霉素抗性取代氨芐青霉素抗性供應(yīng)Strep-tag II載體pASK-IBA2C至pASK-IBA7C。 參考文獻(xiàn):
Skerra, A. (1994). Use of the tetracycline promoter for the tightly regulated production of a murine antibody fragment in Escherichia coli. Gene, 151, 131-135. 　　以下大腸桿菌菌株已與pASK-IBA載體一起成功用于Tet表達(dá)：JM83, WK6, B, BL21, MG1655, W3110, BL21(DE3), BLR(DE3), XL1-Blue, BL21-CodonPlusTM-RIL 　　對(duì)于分泌型蛋白，我們推薦JM83。對(duì)于胞質(zhì)表達(dá)我們推薦大腸桿菌B菌株，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈﹄x子蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，后兩者能在純化過(guò)程中降解蛋白質(zhì)（Grodberg and Dunn, 1988, J.Bacteriol. 170, 1245）。請(qǐng)注意我們不知道有與Tet表達(dá)系統(tǒng)不兼容的大腸桿菌菌株。 無(wú)水四環(huán)素：tetA啟動(dòng)子誘導(dǎo)劑 　　Strep-tag/Strep-Tactin 過(guò)度表達(dá)系統(tǒng)的大腸桿菌表達(dá)框受tetA啟動(dòng)子/操縱子和抑制子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。啟動(dòng)子被低濃度無(wú)水四環(huán)素（AHT）誘導(dǎo),既節(jié)省費(fèi)用也使AHT的抗菌影響降到zui低。Degenkolb 等 (1991) 研究表明，AHT 對(duì)tet抑制子的結(jié)合比四環(huán)素對(duì)tet抑制子的結(jié)合緊密35倍。參考文獻(xiàn):
Degenkolb J, Takahashi M, Ellestad GA, Hillen W, 1991:Antimicrob. Agents Chemother. 35, No 8, 1591-1595 Structural requirements of tetracycline-Tet repressor interaction: Determination of equilibrium binding constants for tetracycline analogues with the Tet repressor. T7表達(dá)系統(tǒng) 特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：

以pPR-IBA載體通過(guò)噬菌體T7啟動(dòng)子高水平表達(dá) 在BL21菌株中，在T7 RNA polymerase作用下高水平轉(zhuǎn)錄 無(wú)毒蛋白高水平表達(dá) IPTG誘導(dǎo) N-端或C-端導(dǎo)入Strep-tag II標(biāo)簽 適合體外轉(zhuǎn)錄和翻譯

原理和特性： 　　Tet啟動(dòng)子具有中等強(qiáng)度，可以導(dǎo)致某些蛋白質(zhì)的高水平表達(dá)（取決于如折疊速度和穩(wěn)定性等難以預(yù)測(cè)的特性）。但是有些蛋白質(zhì)只有經(jīng)強(qiáng)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄才能高水平表達(dá)。在這些情況下我們推薦使用T7啟動(dòng)子。　　T7表達(dá)系統(tǒng)在pPR-IBA載體上編碼，該系統(tǒng)采用T7啟動(dòng)子和T7 RNA聚合酶以使目標(biāo)基因高水平轉(zhuǎn)錄。目標(biāo)基因的表達(dá)受到宿主細(xì)胞中T7 RNA 聚合酶的誘導(dǎo)。這一點(diǎn)可以通過(guò)使用大腸桿菌BL21來(lái)實(shí)現(xiàn)。E. coli BL21染色體上含有T7 RNA 聚合酶基因，該基因受lacUV5啟動(dòng)子控制；而該啟動(dòng)子受IPTG誘導(dǎo)。 查詢多克隆位點(diǎn)請(qǐng)瀏覽http://www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/naps/naps_fr01_02.html 載體序列可從www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/download.html 下載 用于在大腸桿菌中表達(dá)的載體 Strep-tagÒ 載體概覽： 　　IBA提供多種用于在大腸桿菌中表達(dá)的pASK-IBA載體以便攜帶有Strep-tag的重組蛋白表達(dá)。除了抗生素抗性基因（AmpR, CamR），pASK-IBA載體僅在XbaI和HindIII限制性酶切位點(diǎn)之間有區(qū)別。其區(qū)別如下圖所示：您可以在N-或C-端標(biāo)簽之間、細(xì)胞質(zhì)外周表達(dá)或細(xì)胞質(zhì)表達(dá)之間和/或用以去除標(biāo)簽的內(nèi)蛋白酶切割位點(diǎn)（Factor Xa, enterokinase, thrombin 和 TEV protease）之間作選擇。請(qǐng)注意，通常無(wú)須去除標(biāo)簽。 雙標(biāo)簽和6xHistidine-tag載體概覽： 　　除了Strep-tagÒ 載體，IBA還提供帶有Strep-tag和6xHistidine-tag的雙標(biāo)簽載體以及6xHistidine-tag載體。一個(gè)蛋白質(zhì)上的兩個(gè)不同標(biāo)簽?zāi)墚a(chǎn)生zui高的純化因素，使得可以在變性或生理?xiàng)l件下純化全長(zhǎng)蛋白質(zhì)。而且，直接從培養(yǎng)基開(kāi)始的純化操作可以被優(yōu)化?！　≥d體僅在XbaI和HindIII限制性酶切位點(diǎn)之間有區(qū)別。 哺乳動(dòng)物表達(dá)載體 　　IBA的pEXPR-IBA載體是專為哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平表達(dá)和純化重組Strep-tagÒ和/或 6xHistidine-tag融合蛋白而設(shè)計(jì)的。這些載體的克隆策略相同，因而與相應(yīng)的細(xì)菌pASK-IBA質(zhì)粒相兼容。因此，一個(gè)PCR片段可以被平行克隆進(jìn)pASK-IBA及其相等的pEXPR-IBA。人巨細(xì)胞病毒(CMV)立早啟動(dòng)子在很多哺乳動(dòng)物細(xì)胞中提供強(qiáng)表達(dá)。為了延長(zhǎng)在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中表達(dá)的時(shí)間，載體會(huì)在潛伏感染了SV40大T-抗原（如COS7）的細(xì)胞系中復(fù)制。此外，新霉素抗性基因可以允許直接篩選穩(wěn)定的細(xì)胞系。

pEXPR-IBA 特點(diǎn)益處Strep-tag II采用Strep-Tactin基質(zhì)純化重組蛋白CMV 立早啟動(dòng)子/增強(qiáng)子在多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平表達(dá)多克隆位點(diǎn)插入目標(biāo)基因并與Strep-tag和/或6xHistidine-tag融合。與pASK-IBA載體兼容新霉素抗性基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中篩選穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子氨卞青霉素抗性基因在E. coli中篩選pUC復(fù)制起始位點(diǎn)在E. coli中高拷貝復(fù)制BM40 (僅見(jiàn)于pEXPR-IBA42 和44 )使蛋白質(zhì)分泌進(jìn)培養(yǎng)基中Factor Xa, thrombin (thb), enterokinase (ent) ,TEV protease (TEV)切割位點(diǎn)如果需要可以除去Strep-tag（一般不需要）

 用于在酵母中表達(dá)的載體 　　IBA現(xiàn)供應(yīng)兩種帶有Strep-tagÒ和瑞士Dualsystems Biotech AG（www.dualsystmes。。ｃｏｍ）的HA epitope-tag的酵母載體。 特點(diǎn)： l 高水平、可誘導(dǎo)的表達(dá) l 無(wú)需加入用于誘導(dǎo)的試劑或改變培養(yǎng)基 l 誘導(dǎo)受緊密調(diào)控使表達(dá)毒性蛋白質(zhì) 載體pKS1-ST和pKS2-ST組合了蛋白質(zhì)表達(dá)的兩個(gè)重要特點(diǎn)： l 可誘導(dǎo)的ADH2啟動(dòng)子：ADH2啟動(dòng)子受培養(yǎng)基中葡萄糖缺失的誘導(dǎo)。在早期生長(zhǎng)過(guò)程中，葡萄糖充裕，啟動(dòng)子無(wú)活性，因此防止對(duì)酵母生長(zhǎng)的負(fù)效應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞到達(dá)靜止早期時(shí)，葡萄糖被培養(yǎng)基耗盡，ADH2啟動(dòng)子被誘導(dǎo)，產(chǎn)生大量蛋白質(zhì)。 l KanMX表達(dá)框：不象其他酵母表達(dá)載體，pKS-ST載體*一個(gè)KanMX表達(dá)框，使得可以在豐富培養(yǎng)基中以G418篩選。豐富培養(yǎng)基如YPD的使用將顯著增強(qiáng)細(xì)胞密度和蛋白質(zhì)產(chǎn)量。 比較所有Strep-tagÒ, 6´Histidine-tag及double-tag載體

質(zhì)粒Strep-tag6xHis -tagHA epitope-tag分泌Tag去除蛋白酶抗性目錄號(hào)大腸桿菌載體:具有tet啟動(dòng)子用于胞質(zhì)外周表達(dá)pASK-IBA2C-端--YesNo-Amp2-1301-000pASK-IBA4N-端--YesNo-Amp2-1303-000pASK-IBA6N-端--YesYesfactor XaAmp2-1305-000pASK-IBA12N-端--YesYesthrombinAmp2-1311-000pASK-IBA14N-端--YesYesenterokinaseAmp2-1313-000pASK-IBA32-C-端-YesNo-Amp2-1332-000pASK-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp2-1344-000大腸桿菌載體:具有tet啟動(dòng)子用于細(xì)胞質(zhì)表達(dá)pASK-IBA3plusC-端--NoNo-Amp2-1402-000pASK-IBA5plusN-端--NoNo-Amp2-1404-000pASK-IBA7plusN-端--NoYesfactor XaAmp2-1406-000pASK-IBA13plusN-端--NoYesthrombinAmp2-1412-000pASK-IBA15plusN-端--NoYesenterokinaseAmp2-1414-000pASK-IBA17plusN-端--NoYesTEV proteaseAmp2-1416-000pASK-IBA33plus-C-端-NoNo-Amp2-1433-000pASK-IBA35plus-N-端-NoNo-Amp2-1435-000pASK-IBA37plus-N-端-NoYesfactor XaAmp2-1437-000pASK-IBA43plusC-端N-端-NoNo-Amp2-1443-000pASK-IBA45plusN-端C-端-NoNo-Amp2-1445-000pASK-IBA63a-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-100pASK-IBA63b-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-200pASK-IBA63c-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-300pASK-IBA65b-plusN-端--NoNo-Amp2-1465-200大腸桿菌載體:具有tet啟動(dòng)子和氯霉素抗性（CAT）pASK-IBA2CC-端--YesNo-CAT2-1321-000pASK-IBA3CC-端--NoNo-CAT2-1322-000pASK-IBA4CN-端--YesNo-CAT2-1323-000pASK-IBA5CN-端--NoNo-CAT2-1324-000pASK-IBA6CN-端--YesYesfactor XaCAT2-1325-000pASK-IBA7CN-端--NoYesfactor XaCAT2-1326-000大腸桿菌載體:具有T7啟動(dòng)子pPR-IBA1C-端--NoNo-Amp2-1390-000pPR-IBA2N-端--NoNo-Amp2-1391-000哺乳動(dòng)物載體：具有人CMV啟動(dòng)子pEXPR-IBA3C-端-NoNo-Amp/Neo2-1903-000pEXPR-IBA5N-端-NoNo,-Amp/Neo2-1905-000pE, XPR,, , ,, -I, B, A7<, /DIV>N-端-NoYesfactor XaAmp/Neo2-1907-000pEXPR-IBA13N-端-NoYesthrombinAmp/Neo2-1913-000pEXPR-IBA15N-端-NoYesenterokinaseAmp/Neo2-1915-000pEXPR-IBA17N-端-NoYesTEV proteaseAmp/Neo2-1917-000pEXPR-IBA42C-端N-端-YesNo-Amp/Neo2-1942-000pEXPR-IBA43C-端N-端-NoNo-Amp/Neo2-1943-000pEXPR-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp/Neo2-1944-000pEXPR-IBA45N-端C-端-NoNo-Amp/Neo2-1945-000酵母載體：具有ADH2啟動(dòng)子pKS1-STN-端-N-端NoNo-Amp/G4182-3801-000pKS2-STN-端-N-端YesNo-Amp/G4182-3802-000

每個(gè)載體的規(guī)格：5ｕg

產(chǎn)品規(guī)格目錄號(hào)測(cè)序引物pASK-IBA載體：上游測(cè)序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-101pASK-IBA載體：下游測(cè)序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-102pASK-IBA載體：上、下游測(cè)序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-104pPR-IBA載體：上游測(cè)序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-111pPR-IBA載體：下游測(cè)序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-112pPR-IBA載體：上、下游測(cè)序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-114pEXPR-IBA載體：上游測(cè)序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-121pEXPR-IBA載體：下游測(cè)序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-122pEXPR-IBA載體：上、下游測(cè)序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-124